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薄層色譜的使用和注意事項(xiàng)

瀏覽次數(shù):5833發(fā)布日期:2021-08-05

                                                               薄層色譜的使用和注意事項(xiàng)
                                                               圣賓儀器科技上海有限公司          

1、 怎樣提高點(diǎn)樣效率?

點(diǎn)樣是造成TLC定量誤差的主要來(lái)源。實(shí)驗(yàn)證明:定量毛細(xì)管更適合較小體積的點(diǎn)樣;微量注射器更適合較大體積的點(diǎn)樣。這主要是因?yàn)槲⒘孔⑸淦魇苄馀?、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細(xì)管間的點(diǎn)樣誤差、建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細(xì)管。但應(yīng)注意更換樣品時(shí),應(yīng)將毛細(xì)管用超聲波或不同極性溶劑清洗干凈。在制備樣品時(shí),溶樣溶劑黏度不能過(guò)高,以便于點(diǎn)樣;溶劑沸點(diǎn)過(guò)低則進(jìn)樣體積易變,過(guò)高則會(huì)改變展開(kāi)劑組成;對(duì)樣品溶解度過(guò)高會(huì)使樣點(diǎn)發(fā)生空心現(xiàn)象;常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典TLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑3mm點(diǎn)間距1--2cm 底邊距1.5cm;HPLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑1mm點(diǎn)間距5mm 底邊距1cm。

2、展開(kāi)劑的選擇

TLC與HPLC相比,一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)就是流動(dòng)相的選擇具有更大的靈活性。流動(dòng)相的選擇的目的是使絕大部分樣品的RF值位于0.1--0.7之間并達(dá)到較好的分離,與此對(duì)應(yīng)的是流動(dòng)相要有適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和組成。流動(dòng)相強(qiáng)度越大,溶質(zhì)RF值越大,但很可能降低分離能力;另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物,根據(jù)相似相溶原理,要使用多元溶劑體系。一般展開(kāi)劑體系選擇如下:根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個(gè)二元溶劑體系,通過(guò)調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合RF值,適合的RF值找到后,再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個(gè),以這三個(gè)組成為三點(diǎn)組成一個(gè)三角形,則可看到:三角形頂點(diǎn)是二元體系,邊是三元體系,三角形內(nèi)是四元體系,并且極性一致,可根據(jù)幾何原理得出任一點(diǎn)組成。這種方法較為直觀,也較簡(jiǎn)單。

3、TLC的通用顯色方法

理想的顯色希望靈敏度高、斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定、斑點(diǎn)與背景間的對(duì)比度好、斑點(diǎn)的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比。在樣品組成并不*已知的情況下,通用顯色方法顯得成尤為重要。通用顯色法主要有:

(1)、紫外照射法:方便,不破壞樣品;

(2)、碘蒸氣法:通用性強(qiáng),與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用;

(3)、熒光試劑:制造熒光背景,使原來(lái)紫外下無(wú)熒光物質(zhì)被鑒別,有熒光物質(zhì)更明顯;

(4)、硫酸溶液:對(duì)絕大多數(shù)有機(jī)物有效,但有破壞性。

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